Message: Extracción de ADN de germen de trigo
¿Te gustaría ver MONTONES de ADN?
Este método produce enormes cantidades de ADN que puede ser fácilmente colectado.
Aquí esta lo que tienes que hacer para cada extracción de ADN:
Materiales necesarios:
Germen de trigo crudo - 1 gramo o una cucharadita.
El germen de trigo puede ser comprado en tiendas de productos naturales o en grandes supermercados. El germen de trigo tostado no funciona.
Detergente líquido - 1 miligramo o un toquecito de ¼ de cucharadita
Las siguientes marcas de detergente líquido han sido probadas y hemos encontrado que funcionan para este protocolo de extracción de ADN: Lemon Fresh Joy, Woolite, Ivory, Shaper, Arm & Hammer, Herbal Essence shower gel by Clairol, Tide, Dish Drops, Kool Wash, Cheer, Sunlight Dish Soap, Dawn, Delicate, All, and Ultra Dawn.
Los siguientes productos líquidos no funcionan bien: Life Tree, Shout, Shaklee, Sunlight Dishwasher, and LOC. Los detergentes en polvo tampoco producen buenos resultados con este protocolo.
Alcohol - 14 ml o una cucharada
El alcohol isopropílico al 70% es el más barato ya que se puede comprar en el supermercado o en la farmacia. Sin embargo, contienen un mayor porcentaje de agua, por lo que es un poco más difícil precipitar el ADN con el.
El alcohol etílico al 95% (que es 95% alcohol) trabaja bien. Este hace el ADN más fácil de colectar.
Agua de la llave a 50-60° Celsius - 20 ml o una cucharada
No uses agua con temperatura mayor de 50-60° C. El agua se enfriara durante el procedimiento, pero esto no importa. Comprueba la temperatura del agua de la llave, puede que esté suficientemente caliente tal y como sale de la llave.
Tubos de ensayo de 50 ml
Tubos de ensayo con tapa, vasos químicos o frascos de especies.
Cilindro graduado,
Cucharas de medir u otro instrumento de medición.
Palito aplicador de madera,
Varilla o gancho de vidrio para mezclar o un gancho hecho con un clip sujeta papeles para mezclar y colectar la mezcla.
Gotero,
Pipeta de Pauster y una bomba de caucho o piezas de papel toalla los cuales posiblemente sean necesarios para remover espuma.
Contenedores sellables (opcional),
Tal como un tubo, un vial o un frasco para almacenar ADN.
Alcohol al 50% (opcional) - para almacenar ADN.
Puedes usar de igualmente alcohol isopropílico o alcohol etílico para almacenar el ADN que extraigas. Para hacer 100 ml de alcohol al 50% con alcohol isopropílico, mezcla 71 ml de alcohol isopropílico al 70% con 29 ml de agua destilada. Si usas alcohol etílico mezcla 53 ml de alcohol etílico al 95% (etanol) con 47 ml de agua destilada.
Papel toalla
O papel filtro para dejar secando ADN.
Instrucciones
Coloca 1 gramo o una cucharadita de germen de trigo crudo en uno de los tubos de ensayo de 50 ml, vaso químico o frasco.
Añade 20 ml o una cucharada de agua de la llave (entre 50-60 grados Celsius) y mezcla constantemente por 3 minutos.
Añade 1 ml o un toquecito de ¼ de cucharadita de detergente líquido y mezcla suavemente cada minuto por 5 minutos. Intenta no hacer espuma.
Usa el gotero, pipeta o pedacitos de papel toalla para remover cualquier rastro de espuma sobre la solución.
Ladea el tubo de ensayo, vaso químico o frasco. LENTAMENTE vierte 14 ml o una cucharada de alcohol por la pared del tubo de manera que forme una capa sobre la solución de agua, germen de trigo y detergente. No mezcles ambas soluciones. El ADN se precipita en la interfase de agua y alcohol (la interfase es la zona entre el agua y el alcohol). Por esto, es crucial verter el alcohol muy despacio de manera que forme una capa sobre la solución acuosa. Si el alcohol se mezcla con el agua, este se diluye demasiado y el ADN no se precipitará.
Deja el tubo de ensayo, vaso químico o frasco reposar por algunos minutos. ADN firme, pegajoso y de color blanco aparecerá poco a poco donde el agua y el alcohol se tocan. Usualmente podrás ver ADN precipitándose de la solución en la interfase de agua y alcohol tan pronto como viertas el alcohol. Si dejas la preparación reposar por 15 minutos más o menos, el ADN flotará sobre el alcohol.
Normalmente podrás obtener una mayor precipitación de ADN de la solución usando una de las herramientas colectoras de ADN (tal como la varilla de vidrio o el gancho hecho con un clip para sujetar papel) si cuidadosamente levantas la capa de agua hacia el alcohol. Esto permite que una mayor cantidad de ADN entre en contacto con el alcohol y se precipite. Puede que encuentres útil el vertir la solución de agua y detergente dentro de un tubo de ensayo limpio, dejando en el otro tubo el germen de trigo, antes de adicionar el alcohol.
Usa una varilla de vidrio, un gancho hecho con un clip para sujetar papel o un palito de madera para colectar el ADN.
Si quieres conservar el ADN, almacénalo en alcohol al 50 o 70%, en un frasco que se pueda sellar o déjalo secar al aire en papel toalla o papel filtro.
